Southern blot

January 2019 0 2K Report

O Southern blot é uma técnica de biologia molecular utilizada para conferir se uma determinada sequência de DNA encontra-se ou não presente em uma amostra de DNA analisada. Isto é realizado por meio de um realce da eletroforese em gel de agarose. A técnica recebeu esse nome em homenagem ao seu criador, o biólogo britânico Edwin Southern, levando ao batismo de outros métodos blot com trocadilhos ao nome de Southern (significa "do sul", em português), como é o caso de Western blot ("ocidente") e Northern blot ("norte").

O procedimento segue os seguintes passos:

  • Desnaturação: o gel no qual foi realizada a eletroforese de DNA é tratado com uma solução alcalina (habitualmente composta por hidróxido de sódio) para levar à desnaturação da dupla fita de DNA, dividindo-as em simples fitas. A desnaturação é indispensável, pois o DNA nas etapas seguintes irá impregnar-se na membrana e irá parear com a sonda.
  • Transferência do DNA para uma membrana: uma membrana composta de nitrocelulose, ou de nylon, é colocada sobre o gel. É aplicada uma pressão igualmente espalhada sobre o gel, resultando na passagem do DNA presente no gel para a membrana, local no qual se adere. Esta membrana é então aquecida (quando feita de nitrocelulose) ou exibida à radiação ultravioleta (no caso de nylon) para conectar o DNA permanentemente à membrana.
  • Tratamento com a sonda: nesta etapa, a membrana é tratada com uma sonda hidridizadora, sendo esta uma molécula de DNA isolada de seqüência conhecida e é idêntica, ou então complementar, àquela sequência a qual se quer determinar a presença ou não na amostra. A sonda de DNA é marcada de um modo que possibilite sua detecção, sendo normalmente realizada por meio da incorporação de átomos radioativos ou ligando-se a elas corantes fluorescentes ou cromogênicos. Em certas situações, a sonda hibridizada pode ser preparada com RNA, em vez de DNA.Essa sonda irá  parear com qualquer sequência de DNA que for complementar a ela. Deste modo, caso a seqüência buscada não estiver presente na amostra em questão, não ocorrerá o pareamento.Por conseguinte, todo excesso de sonda é lavado da membrana, removendo toda a sonda não hibridizada presente nela, sendo que a presença ou não da sonda e evidenciada por uma auto-radiografia em um filme de raio-x, ou pelo surgimento de uma determinada coloração caso tenha sido utilizada a marcação cromogênica.

    • Fontes: http://pt.wikipedia.org/wiki/Southern_blot http://biomedicinapadrao.blogspot.com/2010/06/southern-blot.html http://pt.scribd.com/doc/33418362/Southern-Blot http://www.fcfar.unesp.br/laboratorio_sandro_valentini/pdf/A40-%20SOUTHERN%20BLOT.pdf http://www.engenhariageneticabioq.page.tl/Hibrida%E7%E3o.htm

    More Questions From This User See All
    Estação de Monta
    Esta prática não possui custos e é de fácil implementação. Tem por objetivo: Answer
    Castração de Cães
    Este assunto envolve bastante polêmica devido aos mitos existentes sobre animais que passam pelo processo de castração, Answer
    Miologia
    Não se sabe ao certo quantos músculos existe no corpo humano. Estudiosos antigos apontavam diferentes valores, como: Cha Answer
    Endoderme
    Este folheto irá dar origem ao arquêntero (intestino primitivo), responsável pela formação do tubo digestivo que se comu Answer
    Inseminação Artificial em Bovinos
    A partir do momento que passaram a congelar o sêmen, a IA tornou-se mais rápida e mais controlada, viabilizando o uso de Answer
    Folhetos Embrionários
    Os folhetos embrionários podem estar presentes em dois ou três, recebendo a classificação de diblásticos e triblásticos Answer
    SUS
    Há um tempo atrás, a saúde era encarada apenas como a ausência de doenças, o que nos legou um quadro repleto não só das Answer
    Células de Sertoli
    Células de Sertoli (indicadas pelas duas seta menores). A seta preta indica uma Célula de Leydig. Answer
    Artrose
    O processo que inicia essa degeneração ocorre quando alguns constituintes protéicos que formam a cartilagem, modificam-s Answer
    Cólica Equina
    São divididas em cólicas primárias e secundárias, de acordo com sua origem: Answer
    Lipofuscina
    O pigmento é um complexo contendo lipídio. A microscopia eletrônica revela que a liposfucina possui uma estrutura amorfa Answer
    Diagnóstico de Prenhez em Bovinos
    O conhecimento da existência ou não da prenhez, facilita a tomada de decisões que podem interferir no índice de produtiv Answer
    Freemartins
    Quando um indivíduo recebe células de outro, ele terá duas populações de células, cada uma oriunda de uma fonte diferent Answer
    Pediculose do Púbis
    Os machos desses insetos medem aproximadamente 1 mm e as fêmeas, que são maiores, 1,5 mm, enquanto que suas lêndeas (ovo Answer
    Alcoolismo
    Além da importância dos fatores ambientais, há evidências que indicam a existência de fatores genéticos que elevam o ris Answer
    Icterícia do recém-nascido
    A maioria dos recém-nascidos apresentam icterícia nos primeiros dias de vida, sem que isso signifique que há a presença Answer
    Endoscopia Digestiva
    Essa técnica permite visualizar a mucosa do trato digestivo, e realizar detalhada avaliação, bem como coletar material o Answer
    Brotoeja
    Tem como etiologia o suor juntamente com a obstrução e inflamação das glândulas sudoríparas. As brotoejas surgem porque Answer
    Doença de Peyronie
    Não se sabe ao certo ainda qual a etiologia dessa calcificação. Todavia, pode ser atribuída, em parte, a pequenos e repe Answer
    Cólica Menstrual
    Pode ter etiologia primária (ou essencial) ou secundária: Answer
    Alopecia Areata
    Essa afecção acomete de 1% a 2% da população mundial, de ambos os sexos, de todas as etnias, podendo surgir em qualquer Answer
    Parasitóides
    Aparentemente, este tipo de relação ocorre com organismos que apresentam uma alta taxa de crescimento, como por exemplo, Answer
    Polialelia
    A polialelia resulta de mutações sucessivas ocorridas nos genes de um determinado locus. Cada gene mutante que surge est Answer
    Hospedeiro Intermediário
    O hospedeiro intermediário é vital no ciclo de vida do parasita, sendo que este desenvolve alguma ou todas as fases larv Answer

    Recommend Questions

    10 exercícios sobre animais vertebrados (com gabarito e comentários)
    É importante entender que nem todos os vertebrados possuem coluna vertebral e crânio. Isso porque, existem
    10 exercícios sobre animais invertebrados e vertebrados com gabarito
    a) Os animais possuem células com o DNA espalhado no citoplasma
    10 exercícios sobre a Segunda Lei de Mendel com gabarito
    A constatação da independência dos fatores se deu através do cruzamento de ervilhas amarelas
    10 exercícios sobre poluição do ar: gabaritos e comentários
    Teste seus conhecimentos sobre poluição atmosférica com os 10 exercícios a seguir.
    Hipopótamo: entenda seus hábitos, alimentação e espécies
    Ambas as espécies são originárias do continente africano, nativas da Etiópia. Contudo, o hip
    Panspermia Cósmica: entenda o que é a teoria e as suas evidências
    O artigo publicado no Centro Científico Conhecer, pelo Dr. Ivan Lima, demonstra que a hipótese da pansperm
    10 exercícios sobre fotossíntese
    O objetivo da fotossíntese é a produção de glicose (carboidrato) através da energia l
    O Sal na Alimentação e na Saúde
    Nem tudo é prejudicial no consumo de sal, contanto que ele seja feito de forma adequada. Popularmente conhecido como sal
    Escala geológica: Éons, Eras, Períodos e Épocas
    O planeta possui, aproximadamente, 4,6 bilhões de anos, divididos em escala cronológica para melhor organi
    Gametófito e esporófito
    No caso das briófitas, a geração gametofítica é a mais desenvolvida. Quando maduros, os gametófitos produzem os gametas

    Helpful Links

    Smile Life

    Show life that you have a thousand reasons to smile

    Get in touch

    © Copyright 2024 ELIB.TIPS - All rights reserved.